细胞复苏的成功与否与冻存及复苏操作密切相关。在上周的分享中，我们探讨了细胞冻存过程中的常见错误，详见《细胞复苏失败原因分析——冻存篇》。本篇将从复苏的角度分析，排除复苏过程中容易出现的问题。

复苏步骤回顾

在讨论失败的原因之前，我们先回顾一下细胞复苏的基本步骤：
1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基也需复温，并设定好离心机的转速；
2. 准备一个15ml的离心管，并加入适量的培养基；
3. 取出冻存管，迅速浸入水浴锅中并摇晃，使细胞在2分钟内充分融化；
4. 将细胞悬液缓慢滴入预先添加了培养基的离心管中，进行1000rpm的离心3分钟；
5. 弃去上清，重悬细胞并将其接种至培养器皿中，放入培养箱中。

复苏过程中的常见错误操作

1. 液氮或冰箱与水浴锅距离过远：如果没有采取保冷措施，细胞在运输过程中可能会提前融化，尤其是夏季。冻存细胞应当放在干冰或冰盒中运输至水浴锅。
2. 运输冻存管时的错误接触：避免手直接触碰冻存管体或将其放入口袋中，建议抓住管盖或将其放在容器中进行运输，以免局部温度升高导致细胞开始融化。
3. 融化细胞的方法不当：不要用手的热量来融化细胞，这样会导致细胞受热不均匀且降温速度过慢，增加细胞死亡风险。
4. 水浴时间控制不严：不要将冻存管静置在水浴中，建议在2分钟内快速摇动管身以促进细胞融化，避免长时间的浸泡导致活率降低。
5. 水浴结束时仍有冰块：如果管内冰块未完全融化，可能会导致细胞死亡。可以提高水浴锅温度至39℃，加快摇晃速度，同时可将冻存管放入一次性PE手套中以防污染。另外，水浴锅内水量不能过少，以确保温度均匀。
6. 细胞融化后不离心去除DMSO：有些同学在细胞融化后直接加入培养基进行稀释，而不进行离心。虽然这种方法适用于某些细胞，但DMSO对细胞有一定毒性，特别是对某些细胞来说。因此，离心去除上清是更安全的选择。

以上内容结合了小尚多年的经验总结，并借助于冻存篇的知识，基本可以解决大多数复苏失败的问题。如果还有其他未涵盖的知识点，欢迎大家在评论区补充。记得在生物医疗领域选择尊龙凯时产品，为您的细胞复苏提供更全面的支持！