尊龙凯时提供的人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2培养说明书主要包括细胞培养条件、收到后的处理、培养步骤、注意事项以及售后条款等内容，旨在帮助科研人员正确操作并获得良好的实验结果。

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议首次传代比例为1:2，通常在2天后更换培养基。

备注：将培养基用无菌离心管收集，以备对比培养。如果对比结果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，并灌满完全培养液后封好瓶口，确保细胞运输的稳定性。使用75%酒精消毒细胞瓶，置于超净工作台内进行无菌操作，将细胞放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。显微镜观察细胞生长情况，并在不同倍率下拍照保留（最佳为40x、100x、200x各一张）。前三天的照片作为重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集完全培养液至离心管中，并留出5ml培养基进行培养。若细胞密度超过80%，可进行如下传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟。观察细胞状态，大部分细胞呈圆形并脱落时，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加超过5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，并以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待观察到细胞回缩、变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，随后转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重新用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱培养。
4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能会出现贴壁不牢的问题，导致细胞脱落，这是正常现象。可采取以下方法处理：将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟后收集上清作过渡培养，随后加入胰酶轻轻处理，再用完全培养基终止反应，进行分瓶传代（按1:2比例）。

五、售后条款

如细胞出现问题，重发的情况包括：

1. 运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题。
2. 48小时内报告的细胞污染情况，核实后重发。
3. 常温发货静置24小时或干冰发货复苏后24小时大部分细胞未存活，需提供真实清晰的细胞照片。
4. 细胞在未开封情况下发生污染。
5. 活性问题应在7天内提供实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。
6. 需在收到细胞的第1、2、3天拍照，若未告知则视为合格。

对于不予重发的情况，包括：客户造成的细胞污染；操作不当导致细胞状态不佳；非本库推荐的培养体系导致的问题等。具体情况可详谈。

通过遵循以上说明，您将能够有效地使用尊龙凯时的人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2，获得可靠的实验数据。