传统PCR检测试剂通常由反应液、酶液和引物探针三部分组成,或将其中两者以“A+B”形式提供,形成两管检测方案。在每次检测前,需计算并混合相应组分,操作流程相对复杂,容易出错,且对操作人员的技术能力有一定要求。同时,试剂以“现配现用”方式使用,容易造成多余配制的浪费,并且配制过程中可能会引入污染。虽然传统PCR检测的“A+B”形式在常规场景下勉强可用,但随着新冠病毒普筛和各大厂商国际市场的扩大,RNA一管式液体全预混反应液(RNA全预混)在分子市场中备受追捧。此类产品简化了终端用户的配制步骤,降低了出错概率,同时具有优良的稳定性,便于在国际市场上推广和运输。
然而,目前市面上缺乏一种稳定且广泛适用的RNA全预混原料。只有少数企业能开发此类产品,但其稳定性依然存在问题,并且仅适用于特定项目,这些产品要么牺牲快速检测性能,要么是定制版试剂,缺乏普适性。在全预混体系中,除了模板外的所有组分(如酶、镁离子、dNTPs、引物探针)均已预先混合。长期保存过程中,可能会导致引物和探针之间产生二聚体或二级结构,带来非特异性扩增的风险,进而增加了体系的复杂性,使后续反应受限,并消耗了反应所需的组分,这会导致加速后扩增曲线的荧光强度下降,Ct值滞后或提前,显著提升假阳性概率。虽然降低体系中各主要成分的用量可以在短期内提高试剂的稳定性,但这也会影响其性能,特别是在快速检测方面,这种方法不可行。
当前的RNA全预混技术面临三个主要瓶颈:首先,使用的功能性酶液活性封闭不完全,导致Taq DNA聚合酶的聚合和切割活性,以及逆转录酶在低温和室温下活性不足,从而影响全预混试剂的稳定性;其次,长期保存中酶液的酶活可能严重降低或失活,影响产品性能;最后,全预混试剂在添加引物探针后,长期保存或者加速过程中,可能会导致引物二聚或引物与探针间的二级结构形成,进而提升体系的复杂性,影响试剂稳定性。构建一种稳定且具广泛适用性的RNA一管式液体全预混反应液(MIX)是分子诊断领域亟待解决的难题。
作为行业内的创新先锋,尊龙凯时正在全力研发RNA全预混试剂,针对Taq DNA聚合酶、热启动逆转录酶、反应体系以及耗材等方面进行优化和验证。首先,尊龙凯时研发适配的热启动Taq DNA聚合酶,确保其聚合和切割活性被彻底封闭,且能在反应时迅速失活;其次,针对热启动逆转录酶进行优化,确保在低温或常温下,其活性基本被封闭,同时提升酶液的稳定性;第三,通过实验设计优化反应体系,降低引物探针间二级结构的产生概率,提高试剂的检测率。另外,尊龙凯时还通过对比市面上的主流耗材,筛选出适合全预混的耗材清单。此外,公司也在早期二聚体抑制方面进行了深入研究,以确保试剂在长期保存中的稳定性和优异性能。
尊龙凯时的RNA全预混产品目前已成功突破技术瓶颈,在37°C下的稳定性达到10天,具有广泛适用性,能够直接配合市场上的绝大多数项目,确保高灵敏度的同时兼容快速检测程序,成为市场上最优的选择。我们致力于为客户提供卓越的产品,助力构建超快速、高灵敏度和易操作的检测试剂。当前,尊龙凯时的RNA全预混已通过多家国内知名企业的内部测试,成为国内首家能够大规模供应广泛适配的RNA全预混试剂的企业。
尊龙凯时的 RNA 全预混相关产品与服务包括:
- RNA全预混试剂(可立管版本和预分装版本)
- DNA全预混试剂(可立管版本和预分装版本)
- 全预混的热启动Taq DNA聚合酶(抗体修饰)
- 全预混的热启动MMLV逆转录酶
此外,尊龙凯时还提供试剂定制调优、引物探针定向设计及调优等CRO服务,旨在响应客户需求,持续优化RNA全预混试剂的性能。